Estudio farmacognóstico preliminar de tallo y raíz de la especie Moringa Oleífera lam cosechada en Machala / Preliminary pharmacognostic study of the stem and root of the species Moringa Oleifera lam grown in Machala

Introducción: la composición química de las especies vegetales está sujeta a cambios, dependiendo, entre otros factores, de la localización geográfica. Moringa oleífera Lam., que crece en Machala, Ecuador, puede diferir de especies de otras regiones geográficas. Objetivo: realizar un estudio farmacognóstico preliminar del tallo y raíz (corteza y pulpa) de la planta M. oleífera cultivada en las áreas de la Unidad Académica de Ciencias Agropecuarias, de la Universidad Técnica de Machala. Métodos: se desarrolla el control de la calidad de la droga cruda según la metodología establecida por la Organización Mundial de la Salud, mediante determinación de la humedad residual, el porciento de cenizas y el porciento de sustancias solubles en el tallo y la raíz. Se cuantificaron algunos metales mediante espectrometría de emisión óptica con plasma acoplado inductivamente. El estudio químico preliminar se efectuó a través de ensayos de tamizaje fitoquímico y mediante cromatografía en capa delgada. Resultados: la humedad residual para ambos órganos y los valores de cenizas obtenidos para la raíz se encuentran dentro de los límites establecidos. Las cenizas totales para el tallo resultaron elevadas. La determinación de metales descartó la presencia de metales tóxicos en los órganos estudiados. Los valores de sustancias solubles indicaron mayor poder extractivo para el agua. La evaluación mediante tamizaje fitoquímico sugirió triterpenos y esteroides, azúcares reductores, alcaloides, flavonoides, aminoácidos y saponinas, en los extractos de la raíz. En el tallo se detectaron, además, catequinas, mucílagos y compuestos fenólicos, no así flavonoides. La cromatografía en capa delgada sugirió la existencia de alcaloides derivados de la fenilmetilamina. Conclusiones: el estudio permitió establecer parámetros de calidad de la droga cruda para la especie estudiada; sugerir, en principio, semejanzas en composición química de la planta analizada con otras de orígenes geográficos diferentes, y comprobar la ausencia de metales tóxicos en los órganos estudiados(AU)

Introduction: The chemical composition of plant species is subject to changes which depend, among other factors, on their geographic location. The Moringa oleifera Lam. growing in Machala, Ecuador, may differ from species from other geographic regions. Objective: Conduct a preliminary pharmacognostic study of the stem and root (bark and pulp) of the plant M. oleifera grown in areas from the Agricultural Sciences Academic Unit of the Technical University of Machala. Methods: Quality control was performed of the crude drug following the methodology set up by the World Health Organization to determine residual humidity, percentage of ashes and percentage of soluble substances in the stem and the root. Several metals were quantified by inductively coupled plasma atomic emission spectroscopy. The preliminary chemical study was conducted by phytochemical screening testing and thin layer chromatography. Results: Both the residual humidity for both organs and the ash values obtained for the root are within the limits established. Total ashes for the stem were high. Metal determination discarded the presence of toxic metals in the organs studied. Values for soluble substances awarded a greater extraction capacity to water. Phytochemical screening pointed to the presence of triterpenes and steroids, reducing sugars, alkaloids, flavonoids, amino acids and saponins in root extracts. The stem was found to also contain catechins, mucilages and phenolic compounds, but not flavonoids. Thin layer chromatography pointed to the presence of alkaloids derived from phenyl methylamine. Conclusions: The study made it possible to set up crude drug quality parameters for the study species, make preliminary suggestions about similarities between the chemical composition of the plant analyzed and other plants of different geographic origin, and verify the absence of toxic metals in the organs studied(AU)

Concentraciones de alcaloides, glucósidos cianogénicos, polifenoles y saponinas en plantas medicinales seleccionadas en Ecuador y su relación con la toxicidad aguda contra Artemia salina / Concentrations of alkaloids, cyanogenic glycosides, polyphenols and saponins in selected medicinal plants from Ecuador and their relationship with acute toxicity against Artemia salina

ResumenEntre los principales compuestos químicos sintetizados por las plantas, pero considerados no esenciales para su metabolismo básico, están los alcaloides, los polifenoles, los glucósidos cianogénicos y las saponinas que tienen diversas funciones en las plantas y reconocidas propiedades medicinales y farmacológicas. En esta investigación se determinaron las concentraciones de los mencionados metabolitos secundarios en los extractos de las hojas de las plantas medicinales Taraxacum officinale, Parthenium hysterophorus, Artemisia absinthium, Cnidoscolus aconitifolius y Piper carpunya y se relacionaron con la toxicidad aguda contra Artemia salina. En cada bioensayo con A. salina se usaron los extractos alcohólicos de las hojas de las plantas seleccionadas a diferentes concentraciones, calculándose la proporción de organismos muertos y los CL50. Las concentraciones de alcaloides, fenoles totales, taninos, glucósidos cianogénicos y saponinas fueron determinadas mediante métodos espectrofotométricos. Este es el primer reporte de cuantificación de metabolitos secundarios en las plantas analizadas provenientes de Ecuador. T. officinale presentó las mayores concentraciones de fenoles (22.30 ± 0.23 mg/g) y taninos (11.70 ± 0.10 mg/g), C aconitifolius de glucósidos cianogénicos (5.02 ± 0.37 µg/g) y P. hysterophorus de saponinas (6.12 ± 0.02 mg/g). Las plantas evaluadas presentaron actividades hemolíticas dependiendo de las concentraciones de saponinas. Los valores de taninos determinados estuvieron entre 0.20 ± 0.01 y 11.70 ± 0.10 mg/g, por lo que no son adversos para su consumo. Aunque los valores de glucósidos cianogénicos son permisibles, es necesario monitorear la presencia de estos compuestos químicos en las plantas para minimizar problemas de salud. Los CL50 obtenidos oscilaron entre los valores 3.37 µg/mL, extremadamente letal o tóxica, para P. carpunya y 274.34 µg/mL, altamente tóxica, para T. officinale. De los análisis de correlaciones realizados a los resultados, se observó que los alcaloides favorecen de manera significativa (p<0.001) a la toxicidad aguda contra A. salina, mientras que a mayor contenido de polifenoles dicha toxicidad disminuye significativamente (p<0.001) el nivel de toxicidad de las plantas. Del análisis de componentes principales, se demuestra que las saponinas están en sinergia con los polifenoles para disminuir la toxicidad, pero tienen un efecto antagónico con los alcaloides y los glucósidos cianogénicos, lo cual evidencia que estos metabolitos secundarios presentan variabilidades en los mecanismos de acción contra A. salina, como compuestos citotóxicos. Estos resultados demuestran que las saponinas y los polifenoles pueden ser letales para A. salina a bajas concentraciones, evidenciando que este bioensayo permite evaluar extractos vegetales que contengan bajas concentraciones de compuestos con altas polaridades. La correspondencia significativamente positiva entre citoxicidad y concentración de los alcaloides, confirmada con el bioensayo de Artemia salina, puede ser útil para hallar fuentes promisorias de compuestos antitumorales y para evaluar los límites tolerables que no afecten otras células benignas. El contenido de metabolitos secundarios hallados en las plantas analizadas les atribuye un gran valor farmacológico.

Abstract:Alkaloids, polyphenols, cyanogenic glycosides and saponins are among the main chemical compounds synthesized by plants but not considered essential for their basic metabolism. These compounds have different functions in plants, and have been recognized with medicinal and pharmacological properties. In this research, concentrations of the mentioned secondary metabolites were determined in the medicinal plants Artemisia absinthium, Cnidoscolus aconitifolius, Parthenium hysterophorus, Piper carpunya and Taraxacum officinale, from Ecuador, and related with cytotoxic effects against Artemia salina. Alcoholic and aqueous extracts from leaves of these selected plants were prepared at different concentrations. To assess cytotoxicity of these extracts, different bioassays with A. salina were undertaken, and the mortality rates and LC50 were obtained. Besides, concentrations of alkaloids, cyanogenic glycosides, phenols, tannins and saponins were determined by spectrophotometric methods; this constituted the first report of quantification of secondary metabolites in the selected plants from Ecuador. T. officinale had the highest concentration of total phenols (22.30 ± 0.23 mg/g) and tannins (11.70 ± 0.10 mg/g), C. aconitifolius of cyanogenic glycosides (5.02 ± 0.37 µg/g) and P. hysterophorus of saponins (6.12 ± 0.02 mg/g). Tannins values obtained were not adverse to their consumption. Alcoholic and aqueous extracts of selected plants had hemolytic activity depending on the concentration of saponins. Although the values of cyanogenic glycosides were permissible, it was necessary to monitor the presence of this metabolite in plants to minimize health problems. LC50 values ranged from extremely toxic (3.37 µg/mL) to highly toxic (274.34 μg/mL), in P. carpunya and T. officinale, respectively. From correlation analysis, it was observed that increase values of alkaloids concentrations had highly significant (p<0.001) acute toxicity against A. salina, while at a higher polyphenol concentration the level of plants cytotoxicity decreased significantly (p<0.001). The results of principal component analysis showed that saponins apparently were in synergy with polyphenols to decrease cytotoxicity, but antagonize with alkaloids and cyanogenic glycosides, indicating that these secondary metabolites present variability in the mechanisms of action against A. salina, as cytotoxic compounds. These results also demonstrate that polyphenols and saponins can be lethal at low concentrations, demonstrating the potential of brine shrimp bioassay as a model to evaluate plant extracts containing low concentrations of chemical compounds with high polarities. The significant positive correlation between cytotoxicity and concentration of alkaloids confirmed by the bioassay of brine shrimp can be useful to identify promising sources of antitumor compounds, and to evaluate tolerable limits not affecting other benign cells. Contents of secondary metabolites found in the selected plants confer them great pharmacologic values. Rev. Biol. Trop. 64 (3): 1171-1184. Epub 2016 September 01.

Evaluación de la capacidad antioxidante y metabolitos secundarios de extractos de dieciséis plantas medicinales / Evaluation of antioxidant capacity and secondary metabolites of sixteen medicinal plants extracts

El presente estudio evaluó la capacidad antioxidante de los extractos de dieciséis plantas medicinales: escoba amarga (Parthenium hysterophons), ajenjo (Artemisia absinthium), guarumo (t), chaya (Cnidoscolus chayamansa), borraja (Borago officinalis), balsa (Ochroma sp.), linaza (Linum usitatissimum), hierba Luisa (Cymbopogon citratus), toronjil (Melissa officinalis), buganvilla (Bougainvillea spectabilis), alcachofa (Cynara scolymus), guaviduca (Piper carpunya), altamisa (Ambrosia cumanensis), diente de león (Taxacum officinales), buscapina (Parietaria officinalis) y moringa (Moringa oleifera). Para ello, se usó el método DPPH (radical 1,1-difenil-2-picrilhidrazil); además, se realizaron ensayos de reconocimiento de metabolitos secundarios a fin de obtener los primeros indicios de compuestos de interés fitoquímico. La actividad captadora de radicales libres de los extractos se expresó como valor de IC50 (µg/mL) (cantidad necesaria para inhibir la formación de radicales DPPH en un 50%). El valor bajo de IC50 refleja mejor acción eliminadora de radicales libres. Aunque la mayoría de las muestras evaluadas mostraron buena capacidad antioxidante con este método (DPPH), los ensayos de los extractos hidro-alcohólicos demuestran que la alcachofa (IC50 9,89 µg/mL), moringa (IC50 11,4 µg/mL) y borraja (IC50 14,0 µg/mL) presentaron mayor capacidad antioxidante. Mediante las pruebas químicas de caracterización, se detectó la presencia de flavonoides, taninos, triterpenos, alcaloides y saponinas en la mayoría de las especies analizadas (aproximadamente 56-69%); tan sólo un 20% de las mismas mostró la presencia de polifenoles, glucósidos cianogénicos, lactonas, cumarinas, esteroles y antraquinonas. Según los resultados, se podría considerar a estas plantas como fuentes prometedoras de metabolitos secundarios con actividad antioxidante. ABSTRACTThis study evaluated the antioxidant capacity of sixteen medicinal plants: Escoba amarga (Parthenium hysterophons), ajenjo (Artemisia absinthium), guarumo (Cecropia obtusifolia), chaya (Cnidoscolus chayamansa), borraja (Borago officinalis), balsa (Ochroma sp.), linaza (Linum usitatissimum), hierba Luisa (Cymbopogon citratus), toronjil (Melissa officinalis), buganvilla (Bougainvillea spectabilis), alcachofa (Cynara scolymus), guaviduca (Piper carpunya), altamisa (Ambrosia cumanensis), diente de León (Taxacum officinales), buscapina (Parietaria officinalis)and moringa (Moringa oleifera). For this, the DPPH (radical 1, 1-difenil-2-picrilhidrazil) method was used; furthermore, recognition assays of secondary metabolites were performed, in order to obtain the first signs of phytochemical compounds of interest. The free radical scavenging activity of the extracts was expressed as IC50 value (g/mL) (necessary amount to inhibit the formation of 50% of DPPH radical). The low value of IC50 reflects better free radical scavenging action. Although most of the samples tested showed good antioxidant capacity with this method (DPPH), tests of hydroalcoholic extracts show that alcachofa (IC50 9.89 mg/mL), moringa (IC50 11.4 mg/mL) and borraja (IC50 14.0 mg/mL) were those with higher antioxidant capacity. Through chemical characterization tests, the presence of flavonoids, tannins, triterpenes, alkaloids and saponins were detected in most of the analyzed species (approximately 56-69%); only 20% of them showed the presence of polyphenols, cyanogenic glycosides, lactones, coumarins, anthraquinones and sterols. According to the results obtained, these plantsmight be considered as promising sources of secondary metabolites with antioxidant activity.

Distribución de metales pesados en los sedimentos superficiales del Saco del Golfo de Cariaco, Sucre, Venezuela

Heavy metal distribution in superficial sedimenta ta Saco, Gulf of Cariaco, Sucre, Venezuela. The Gulf of Cariaco is a marine ecosystem with high primary productivity, which gives it an ecological and socioeconomic importance. Nevertheless, anthropogenic activities around the Gulf produce wastes that are deposited directly or by runoff into the sediments, and consequently, increases concentrations of metals in this ecosystem. The objective of this study was to determine the distribution of cadmium, copper, lead, manganese, nickel and zinc in geochemical fractions of surface sediments, using modified BCR sequential extraction procedure. The concentrations were measured using flame atomic absorption spectroscopy. In addition, the contents of soluble and exchangeable metals associated to carbonate fractions, determined by BCR, were compared with those determined by the method of Campanella. Samples were collected in 12 stations during June 2007. The applied methodologies were evaluated with a certified reference material of marine sediments (HISS-1) and the results indicated that these methods provide adequate accuracy and precision for the extraction of metals. The total metal concentrations (μg g-1) were, Cd: < limit of detection (LD)-5.0; Pb: 1.79-60.41; Cu: no detected (ND)-42.18; Zn: 25.13-104.57; Mn: 66.31-80.29 and Ni: 3.29-24.58. Cd, Cu, Ni and Pb at several stations, exceeded the Canadian Sediment Quality Guidelines of the Lowest Effect Levels (LEL). Cadmium was identified as being the most mobile of the elements, having the highest concentrations in soluble and exchangeable cations and carbonates. However, Pb, Cu, Mn and Zn levels were found highly associated to organic matter and sulfide fractions. The methods did not show significant statistical differences for the extraction of soluble and exchangeable cations and the metals associated to carbonate fraction. There are several significant correlations between heavy metals, which suggest their common origin. Rev. Biol. Trop. 58 (Suppl. 3): 129-140. Epub 2010 October 01.

El Golfo de Cariaco es un ecosistema marino con mucha productividad primaria, lo que le confiere especial importancia ecológica y socioeconómica. Sin embargo, los desechos de las actividades antropogénicas son descargados directamente o arrastradas por las escorrentías. El objetivo de este estudio fue determinar la distribución de cadmio, cobre, plomo, manganeso, níquel y zinc en las fracciones geoquímica de los sedimentos superficiales, usando el método modificado de extracción secuencial de la Comunidad Europea (BCR). Las concentraciones de los metales fueron medidas por espectroscopía de absorción atómica. Además, se compararon los contenidos de metales intercambiables y asociados a los carbonatos determinados por el procedimiento BCR modificado con los determinados por el método de Campanella. La recolección de muestras se hizo en 12 estaciones del sector oriental del Golfo de Cariaco, Estado Sucre, específicamente en el sector conocido como el Saco, en junio 2007. Las metodologías aplicadas fueron evaluadas usando un material de referencia certificado de sedimentos marino (HISS - 1). Los resultados indicaron que los métodos proveen exactitud y precisión adecuadas para la extracción de metales. Las concentraciones totales (μg g-1) fueron, Cd: < límite de detección (LD)-5.0; Pb: 1.79- 60.41; Cu: no detectado (ND)-42.18; Zn: 25.13-104.57; Mn: 66.31-80.29 y Ni: 3.29-24.58. Cd, Cu, Ni y Pb excedieron en varias estaciones los límites que pueden afectar la biota, establecidos por la Guía de Evaluación de la Calidad de los Sedimentos de Canadá. El cadmio fue el metal identificado como el más móvil, teniendo las más altas concentraciones como intercambiable y asociado a las fracciones de carbonatos. Sin embargo, Pb, Cu, Mn y Zn mostraron su mayor abundancia en la fracción asociada a materia orgánica y azufre. Los métodos no presentan diferencias significativas para extraer la primera fracción. Se encontraron significantes correlaciones entre los metales pesados que sugieren su origen común.

Determinación de tioles totales y tioles solubles en ácido en el pez colossoma macropomum (cuvier, 1818) expuesto a cadmio / Total and Soluble Thiols in Acid Determination on the Freshwater Fish Colossoma macropomum (Cuvier, 1818) Exposed to Cadmium

En el presente estudio se evaluó la distribución de tioles totales y de tioles solubles en ácido en diferentes tejidos del pez dulceacuícola Colossoma macropomum en condiciones de cultivo, y aclimatados en el laboratorio durante 15 y 30 días, y el efecto del cadmio sobre estos parámetros en organismos expuestos durante 21 días y depurados 15 días después de la exposición al metal. La distribución de tioles totales (TT) y de tioles solubles en ácido (TSA) varió con las condiciones ambientales en las cuales se encontraban los organismos, observándose que en peces en cultivo, los mayores valores de TT se presentan en el plasma>músculo>branquias, en peces aclimatados a condiciones de laboratorio (15 días), se observó la siguiente distribución: branquias>músculo>hígado>plasma>riñón y en peces aclimatados 30 días fue branquias>riñón>hígado>músculo>plasma. Para los TSA, la distribución fue la siguiente: organismos provenientes de condiciones de cultivo: músculo>plasma>hígado>branquias. En los peces con 15 días de aclimatación: hígado>branquias>músculo; el riñón y el plasma presentaron valores cercano a cero. En peces con 30 días de aclimatación fue branquias>músculo>hígado>riñón>plasma. La exposición crónica a cadmio produjo un aumento significativo de la concentración de TT y de TSA en el plasma. Los organismos depurados 15 días disminuyeron la concentración de TSA en plasma no así la de TT. La determinación de tioles, podría considerarse un importante parámetro auxiliar, en el diagnóstico y monitoreo de peces expuestos a ambientes contaminados por cadmio.

In this study was evaluated the distribution of total thiols (TT) and acid soluble thiols (AST) in tissues of the freshwater fish Colossoma macropomum providing of cultivation and acclimated in laboratory by 15 and 30 days, as well, was evaluated the effect of cadmium on these parameters in Cd-exposure fishes during 21 days and in Cd-depuration fishes (15 days). TT and AST showed variations with environmental conditions; In Farmer fishes were, TT: plasm>muscle>gills; acclimated fishes (15 days): gills>muscle>liver>plasm>kidney and acclimated fishes (30 days): gills>kidney>liver>muscle>plasm. The distribution of AST was: farmer fishes: muscle>plasm>liver>gills. Acclimated fishes (15 days): liver>gills>muscle; the kidney and the plasm presented near values to zero, and acclimated fishes (30 days) was gills>muscle>liver>kidney>plasm. Cadmium exposition produced a significant increase in the TT and TSA concentration of plasm. Cd-depured fishes showed a decrease in plasm TSA concentration but not in plasm TT concentration. Thiol assays could be considered an important parameter in the diagnosis and monitor of fishes environmental Cd exposed.

Paralytic Shellfish Poisoning (PSP) in Margarita Island, Venezuela

A severe outbreak of Paralytic Shellfish Poisoning (PSP) occurred in Manzanillo and Guayacán, northwestern coast of Margarita Island, Venezuela, between August and October 1991. A bloom of dinoflagellates including Prorocentrum gracile, Gymnodinium catenatum and Alexandrium tamarense seemed to be responsible for this outbreak. Levels of PSP toxins in mussels (Perna perna) exceeded the international safety limit of saxitoxin, 80 µg STX/100 g meat. PSP toxin values varied between 2 548 and 115 µg STX/100 g meat in Manzanillo, and between 1 422 and 86 µg STX/100 g meat in Guayacán. At both locations, the highest levels were detected in August, when 24 patients exhibited typical symptoms of PSP toxicity after consuming cooked mussels (16 required hospitalization). A high pressure liquid chromatographic (HPLC) procedure was recently used on the 1991 samples. The major toxin detected in samples of both locations was decarbamoyl saxitoxin (dcSTX), but low concentrations of saxitoxin were also found in Manzanillo samples. Gonyautoxins GTX1, GTX2 and GTX3 were detected only at Guayacán, while in both locations, decarbamoylgonyatouxin (dcGTX2,3) toxins were detected. These findings represent the first time that causative toxins of PSP in Venezuela have been chemically identified, and confirm the presence of dcSTX and dcGTX in mussels from the Caribbean Sea. The presence of dcSTX and dcGTX in shellfish is indicative that Gymnodinium catenatum was a causative organism for outbreak of PSP

Un severo brote de intoxicación paralizante por moluscos (PSP en inglés) ocurrió en Manzanillo y Guayacán en la costa noroeste de la Isla de Margarita, Venezuela entre agosto y octubre de 1991. Una proliferación de Prorocentrum gracile, Gymnodinium catenatum y Alexandrium tamarense causó el brote. Los niveles de PSP en mejillón (Perna perna) superaron los niveles máximos permisibles de saxitoxina, 80 µg STX/100g carne. Los niveles de toxinas variaron entre 2 548 y 115 µg STX/100 g carne en Manzanillo y entre 1 422 y 86 µg STX/100g carne en Guayacán. En ambas localidades, los máximos niveles se detectaron en agosto, cuando 24 personas presentaron síntomas típicos de PSP después de consumir mejillones cocidos (16 fueron hospitalizados). Se aplicó recientemente cromatografía líquida de alta presión (HPLC) a muestras del año 1991 y la toxina más detectada fue decarbamoyl saxitoxina (dcSTX), pero también se encontró saxitoxinas en muestras de Manzanillo. Las gonyautoxinas GTX1, GTX2 y GTX3 solo se encontraron en Guayacán; en ambas localidades se detectó decarbamoylgonyatouxin (dcGTX2,3). Estos hallazgos representan la primera vez que las toxinas causantes de un brote de PSP en Venezuela han sido químicamente identificadas, confirmando la presencia de dcSTX y dcGTX en mejillones del mar Caribe. La presencia de dcSTX y dcGTX en moluscos, indica que G. catenatum fue el organismo responsable de la intoxicación